49844-36-2

49843-98-3

步驟3：將6-氯-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-1-羧酸乙酯（1g，3.60mmol，1.00當量）與NH3的甲醇溶液（7M，15mL）加入30mL高壓反應釜中。密封反應釜，在100℃下攪拌反應15小時。反應完成后，將反應混合物在減壓下濃縮，除去溶劑。粗產(chǎn)物通過制備型高效液相色譜（HPLC）進行純化，具體條件如下：色譜柱為Bridge Shield RP18 OBD柱（5μm，19×150mm）；流動相為水（含0.05%三氟乙酸）和乙腈（乙腈比例在10分鐘內(nèi)從31.0%升至42.0%）；檢測波長為UV 254/220nm。最終得到6-氯-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-1-甲酰胺400mg（收率45%），為白色固體。產(chǎn)物結(jié)構經(jīng)核磁共振氫譜（400MHz，DMSO-d6）確認：δ 10.81（s，1H），7.44-7.36（m，2H），7.29（m，1H），7.10（s，1H），7.00（m，1H），3.66（m，1H），2.64-2.56（m，2H），2.11-1.89（m，3H），1.70（m，1H）。液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（LC-MS）分析顯示：m/z = 249 [M + H]+。

參考文獻：

[1] Journal of Medicinal Chemistry, 2005, vol. 48, # 25, p. 8045 - 8054

[2] Patent: US2005/256181, 2005, A1. Location in patent: Page/Page column 20

[3] Patent: US2017/190664, 2017, A1. Location in patent: Paragraph 0237; 0242-0243

[4] Journal of Medicinal Chemistry, 2005, vol. 48, # 25, p. 8045 - 8054

[5] Patent: WO2013/57258, 2013, A1. Location in patent: Page/Page column 13

EX 527有效抑制SIRT1去乙?；富钚裕琁C50為38 nM, 這種作用存在濃度依賴性，而抑制SIRT2和SIRT3時，效果低很多，IC50分別為19.6 μM和48.7 μM。EX 527 濃度高達100 μM時也不抑制SIRT4-7和I/II類 HDAC活性。1 μM EX-527 單獨作用于NCI-H460 細胞，不能檢測p53在lysine 382位點的乙酰化作用。EX-527作用于受遺傳毒性試劑Etoposide, Adriamycin, Hydroxyurea, 和H2O2影響的NCI-H460細胞，人類乳腺上皮細胞,U-2 OS 和MCF-7 細胞，顯著提高乙?；痯53的量。但是EX 527在p53控制的基因表達, 細胞存活,或細胞增殖方面沒有檢測效果。 EX 527 在0.1% 血清而不是10%血清中處理7天，作用于HCT116細胞，顯著提高細胞數(shù)，提高達90%，說明在無細胞因子的情況下，SirT1是細胞增殖的顯著調(diào)節(jié)器。 EX 527 作用于INS-1E細胞,廢除白藜蘆醇對葡萄糖的反應的影響，且抑制白藜蘆醇誘導的Glut2, 葡萄糖激酶，Pdx-1,和Tfam的上調(diào), 因為EX 527和白藜蘆醇作用于SIRT1脫乙?；富钚缘淖饔檬窍喾吹?。