663611-73-2

869886-90-8

869886-67-9

在步驟4中，首先對(duì)干燥且潔凈的50L反應(yīng)燒瓶進(jìn)行氮?dú)獯祾?0分鐘以確保無(wú)氧環(huán)境。隨后，向反應(yīng)器中加入DMF（30.20kg）并啟動(dòng)攪拌。維持反應(yīng)溫度在15-25℃范圍內(nèi)，緩慢加入ASYM-112394（校正后2.76kg），直至固體完全溶解。接著，將反應(yīng)混合物冷卻至-10至-20℃，并在此溫度下加入1-羥基苯并三唑水合物（2.10kg）。然后，分五次以約5-10分鐘的間隔加入EDCI（2.41kg）。進(jìn)一步將混合物冷卻至-20至-30℃，并加入ASYM-111888（1.96kg）。隨后，以3-4kg/h的速率滴加DIEA（1.77kg）。完成加料后，以5-10℃/h的速率升溫至15-25℃，并在此溫度下維持反應(yīng)。反應(yīng)過(guò)程中，每隔6-8小時(shí)取樣，通過(guò)HPLC監(jiān)測(cè)ASYM-112394的含量，直至其降至2%以下。反應(yīng)完成后，將混合物冷卻至0-10℃，并用預(yù)先冷卻至0-10℃的乙酸乙酯（28.80kg）和水（12.80kg）混合溶液進(jìn)行淬滅。隨后，用乙酸乙酯（28.80kg）萃取三次，每次萃取攪拌20-30分鐘，靜置20-30分鐘后分離有機(jī)相。合并有機(jī)相，用純凈水（12.80kg）洗滌兩次，每次攪拌20-30分鐘并靜置分離。之后，通過(guò)在線流體過(guò)濾器過(guò)濾有機(jī)相，并將濾液轉(zhuǎn)移至300L搪玻璃反應(yīng)器中。用5%乙酸溶液（由乙酸2.24kg和水42.50kg配制）洗滌有機(jī)相兩次，加入速率為10-20kg/h。接著，用碳酸鈉溶液（由碳酸鈉9.41kg和水48.00kg配制）洗滌兩次，再用氯化鈉溶液（由氯化鈉16.00kg和水44.80kg配制）洗滌兩次。將洗滌后的有機(jī)相轉(zhuǎn)移至300L搪玻璃反應(yīng)器中，加入無(wú)水硫酸鈉（9.70kg），在15-30℃下攪拌2-4小時(shí)。過(guò)濾混合物，濾餅用硅膠（7.50kg）預(yù)裝的nutche過(guò)濾器處理，并用乙酸乙酯（14.40kg）洗滌。合并濾液，通過(guò)在線流體過(guò)濾器轉(zhuǎn)移至72L燒瓶中，在40℃下減壓濃縮（壓力-0.08MPa）至剩余3-4L。加入MTBE（4.78kg），冷卻至0-10℃攪拌結(jié)晶。1小時(shí)后取樣，通過(guò)重量分析監(jiān)測(cè)母液重量百分比，直至達(dá)到5%或連續(xù)樣品間變化不超過(guò)1%。最后，通過(guò)真空過(guò)濾收集產(chǎn)物，濾餅在30-40℃下氮?dú)獗Ｗo(hù)干燥至KF≤0.5%，得到3.55kg灰白色固體產(chǎn)物，純度100%。產(chǎn)物經(jīng)XRPD分析確認(rèn)結(jié)構(gòu)，具體峰位和強(qiáng)度見(jiàn)原文表2和表3。

參考文獻(xiàn)：

[1] Patent: WO2016/123574, 2016, A1. Location in patent: Paragraph 0233; 0234; 0235; 0236

[2] Patent: WO2016/123581, 2016, A1. Location in patent: Paragraph 146; 0151; 0152; 0153; 0154

[3] Patent: WO2005/113541, 2005, A1. Location in patent: Paragraph 0089

在一個(gè)包含b-RAFV600E突變體的A375黑色素瘤細(xì)胞中，Ulixertinib降低磷酸化的ERK2 (pERK)水平和下游激酶RSK (pRSK)的磷酸化水平，IC50分別為4.1/0.14 μM。Ulixertinib也會(huì)抑制A375細(xì)胞增殖，IC50為180 nM。