脂蛋白酯酶（Lipoprotein lipase，LPL）試劑盒說明書
分光光度法50管/24樣
注 意：正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
脂蛋白酯酶（Lipoprotein lipase，LPL）試劑盒測定意義：
脂蛋白酯酶是脂肪細(xì)胞、心肌細(xì)胞、骨骼肌細(xì)胞、乳腺細(xì)胞及巨噬細(xì)胞等實(shí)質(zhì)細(xì)胞合成的一種酶，可催化甘油三脂水解為脂肪酸和單酸甘油酯，以供組織氧化供能和貯存，并在不同的組織表現(xiàn)出不同的生理意義。
測定原理：
脂蛋白酯酶水解4-硝基苯棕櫚酸酯產(chǎn)生4-硝基苯酚，在400nm有特征吸收峰。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：
天平、冷凍離心機(jī)、研缽、水浴鍋、可見分光光度計(jì)、1 mL玻璃比色皿。
試劑組成和配制 ：
試劑一：液體60mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體10mL×1瓶，4℃避光保存。
試劑三：液體25mL×1瓶，4℃保存。
樣品處理：
1. 組織：按照質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL試劑一）加入試劑一，冰浴勻漿后于4℃，10000g離心10min，取上清待測。
2. 細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL試劑一）加入試劑一，冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后于4℃，10000g離心10min，取上清待測。
3. 血清：直接測定。
脂蛋白酯酶（Lipoprotein lipase，LPL）試劑盒測定操作：
| 對照管 | 測定管 |
樣品（μL） | 100 | 100 |
試劑一（μL） | 400 |
|
試劑二（μL） |
| 400 |
混勻，45℃水浴10min |
試劑三（μL） | 500 | 500 |
充分混勻，25℃靜置2min，于1mL玻璃比色皿，蒸餾水調(diào)零，測定400nm處吸光值，記為A對照管和A測定管，△A=A測定管- A對照管 |
計(jì)算公式：
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y= 0.0581x -0.0169，R2=0.9982
1．按照蛋白濃度計(jì)算
酶活性定義：在45℃，pH7.5條件下，每毫克蛋白每分鐘水解產(chǎn)生1μmol 4-硝基苯酚為一個酶活力單位。
LPL活性（μmol /min/mg prot）= （△A+0.0169）÷ 0.0581×V反總÷（V樣×Cpr）÷T
= 17.21×（△A+0.0169）÷Cpr
2．按照樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活性定義：在45℃，pH7.5條件下，每克組織每分鐘水解產(chǎn)生1μmol 4-硝基苯酚為一個酶活力單位。
LPL活性（μmol /min /g 鮮重）=（△A+0.0169）÷0.0581×V反總÷（W×V樣÷V樣總）÷T
= 17.21×（△A+0.0169）÷W
3．按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
酶活性定義：在45℃，pH7.5條件下，每104個細(xì)胞每分鐘水解產(chǎn)生1μmol 4-硝基苯酚為一個酶活力單位。
LPL活性（μmol /min /104 cell）= （△A+0.0169）÷0.0581×V反總÷（V樣×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總）÷T
= 17.21×（△A+0.0169）÷細(xì)胞數(shù)量
4．按照液體體積計(jì)算
酶活性定義：在45℃，pH7.5條件下，每毫升血清每分鐘水解產(chǎn)生1μmol 4-硝基苯酚為一個酶活力單位。
LPL活性（μmol /min /mL）=（△A+0.0169）÷0.0581×V反總÷V樣÷T
= 17.21×（△A+0.0169）
V反總：反應(yīng)總體積，1mL；V樣：反應(yīng)體系中加入樣本體積，0.1mL；W：樣本質(zhì)量，g；V樣總：加入提取液體積，1mL；T：反應(yīng)時間，10min
注意事項(xiàng)：
1. 試劑三加入混勻后靜置兩分鐘立即測定，否則影響吸光值。
2. 吸光值過高或者測定結(jié)果不穩(wěn)定，則將酶液進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂專⒃谟?jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
關(guān)鍵字： 脂蛋白酯酶（Lipoprotein li;脂蛋白酯酶（Lipoprotein li;
上海雅吉生物科技有限公司成立于2011年3月，是一家面向生命科學(xué)領(lǐng)域，提供科研類試劑、耗材、儀器、技術(shù)服務(wù)的生物企業(yè)。包括分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、細(xì)胞學(xué)等 。旗下?lián)碛?“雅吉生物”、“晶風(fēng)生物”、“彩佑實(shí)業(yè)”、“GTX” 品牌。通過公司各部門員工的共同努力在行業(yè)內(nèi)擁有較高知名度，深得新老客戶厚愛，本著“優(yōu)質(zhì)、服務(wù)、信譽(yù)”的精神，堅(jiān)持以優(yōu)良的技術(shù)、優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品、良好的信譽(yù)為國內(nèi)外廣大用戶提供優(yōu)質(zhì)生物產(chǎn)品和服務(wù)。
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本公司鄭重承諾：質(zhì)量保證、供貨及時、服務(wù)周到。