3X Flag多肽是一種帶有FLAG標(biāo)簽的多肽,以下是對(duì)其的詳細(xì)描述:
?序列特點(diǎn)?:3X Flag多肽包含三個(gè)重復(fù)的Asp-Tyr-Lys-Xaa-Xaa-Asp基序,其中Xaa通常為特定氨基酸(如Gly或Ser),以增加序列的靈活性和溶解度。這一多肽序列也可以表示為DYKDDDDK的重復(fù),其中DYKDDDDK是FLAG標(biāo)簽的編碼序列,由8個(gè)氨基酸組成。因此,3X Flag多肽是一種含有23個(gè)氨基酸的合成多肽,由三個(gè)DYKDDDDK序列組成。
?經(jīng)典序列?:在C端,有一個(gè)由8個(gè)氨基酸組成的經(jīng)典FLAG序列Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys,這是與Anti-FLAG抗體結(jié)合的關(guān)鍵部位。
?蛋白分離純化?:3X Flag多肽與目標(biāo)蛋白融合表達(dá)后,可以利用商業(yè)上可獲得的、高度特異性的FLAG抗體或與之結(jié)合的親和樹(shù)脂(如FLAG M2樹(shù)脂)來(lái)捕獲這些融合蛋白。這種方法基于抗原-抗體相互作用或特定分子間的親和力,能夠高效且特異性地從復(fù)雜混合物(如細(xì)胞裂解液、組織提取物或發(fā)酵液中)中分離出目標(biāo)蛋白。
?目標(biāo)蛋白競(jìng)爭(zhēng)性洗脫?:在純化過(guò)程中,一旦目標(biāo)蛋白被FLAG親和樹(shù)脂捕獲,可以通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性洗脫的方式將其從樹(shù)脂上釋放。這通常涉及使用高濃度的FLAG肽段(如游離的3X Flag多肽)作為競(jìng)爭(zhēng)性配體,它們與樹(shù)脂上的FLAG抗體或結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合,從而替代并釋放出原本結(jié)合的目標(biāo)蛋白。這種方法既保持了目標(biāo)蛋白的活性,又允許了純化過(guò)程的靈活性和可控性。
?檢測(cè)與定位?:3X Flag多肽具有良好的抗原性和反應(yīng)性,能夠與特定的抗FLAG抗體結(jié)合,從而實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)蛋白的定位、檢測(cè)以及純化。由于包含多個(gè)FLAG標(biāo)簽序列,3X Flag多肽可顯著提高檢測(cè)靈敏度,能夠檢測(cè)低至10fmol的融合蛋白,這對(duì)于低表達(dá)水平的蛋白質(zhì)檢測(cè)尤為重要。
?強(qiáng)抗原性?:由于FLAG標(biāo)簽序列的特定排列,3X Flag多肽具有很強(qiáng)的抗原性,便于通過(guò)Western Blot、ELISA等方法進(jìn)行檢測(cè)和鑒定。
?可去除性?:Flag標(biāo)簽可以用腸激酶法處理去除,腸激酶能夠特異性地作用于C端的5個(gè)氨基酸多肽序列,從而得到特異的目的蛋白。
?儲(chǔ)存條件?:3X Flag多肽應(yīng)在干燥、低溫條件下儲(chǔ)存,以保持其活性和穩(wěn)定性。通常建議儲(chǔ)存在-20℃或更低溫度下。
?安全性?:在正常實(shí)驗(yàn)操作下,3X Flag多肽的安全性較高。但應(yīng)遵守相關(guān)實(shí)驗(yàn)室規(guī)范和安全操作指南,避免接觸到眼睛、皮膚和吸入,以防過(guò)敏或其他可能的不良反應(yīng)。
綜上所述,3X Flag多肽作為一種強(qiáng)大的生物標(biāo)記工具,在蛋白質(zhì)科學(xué)研究中發(fā)揮著不可替代的作用,極大地促進(jìn)了蛋白質(zhì)分離純化技術(shù)的發(fā)展。
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