MTT溶液(5mg/ml)
簡介：
MTT全稱為3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide，漢語化學(xué)名為3-（4，5-二甲基噻唑-2）-2，5-二苯基四氮唑溴鹽，是一種黃顏色的染料。MTT比色法是一種檢測細胞存活和生長的方法。MTT細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒(MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)被廣泛應(yīng)用于細胞增殖和細胞毒性的檢測。MTT檢測原理在于活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性 MTT還原為水不溶性的藍紫色結(jié)晶甲瓚(Formazan)并沉積在細胞中，而死細胞無此功能。在特定溶劑(如DMSO)存在的情況下，可以被完全溶解。然后通過酶標儀可以測定570 nm波長附近的吸光度。通過OD值的大小，可以判斷活細胞的數(shù)量或活性，在一定細胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成的量與活細胞的數(shù)量或活性成正比。細胞增殖越多越快，則吸光度越高；細胞毒性越大，則吸光度越低。
組成：
產(chǎn)品名稱 | CD003-10ml | Storage |
MTT solution(5mg/ml) | 10ml | -20 ℃避光 |
說明書 | 一份 |
保存條件：
-20 ℃避光保存,18個月有效期。
操作步驟（僅供參考）：
1、 細胞用含血清的培養(yǎng)液培養(yǎng)至對數(shù)生長期，常規(guī)胰蛋白酶消化液消化細胞（懸浮細胞無需消化）。
2、 低速離心，收集細胞沉淀。
3、 用培養(yǎng)液重懸細胞沉淀，制備成單細胞懸液，并計數(shù)。
4、 細胞接種于96孔培養(yǎng)板，一般接種密度為3000～10000 /孔。通常細胞增殖實驗每孔加3000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入6000個細胞即可。具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定。
5、 37℃5% CO2繼續(xù)培養(yǎng)或按照實驗具體需要進行培養(yǎng)，一般培養(yǎng)6～24h。
6、 按照實驗具體要求，給予0～20ul干預(yù)藥物處理，37℃ 5% CO2繼續(xù)培養(yǎng)至合適時間。
7、 棄培養(yǎng)液，每孔加入10ul MTT solution和100ul新鮮培養(yǎng)液，在細胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育4h。
8、 棄培養(yǎng)液，每孔加入110ul DMSO，置搖床上低速振蕩10min，使結(jié)晶物充分溶解。如果紫色結(jié)晶較小或較少，溶解的時間會短一些。如果紫色結(jié)晶較大或較多，溶解的時間會長一些。
9、 在酶聯(lián)免疫檢測儀570 nm測定各孔吸光度。
注意事項：
1、 MTT solution(5mg/ml)盡量減少反復(fù)凍融的次數(shù)，以免失效，當顏色變?yōu)榛揖G色時，請勿使用。
2、 由于使用96孔板進行檢測，如果細胞培養(yǎng)時間較長，應(yīng)注意蒸發(fā)問題。
3、 MTT solution在低溫情況下會凝固，使用前請置于室溫或20～25 ℃水浴至全部融解后使用。
4、 觀察formazan是否完全溶解，亦可以借助光學(xué)顯微鏡觀察。
5、 培養(yǎng)細胞時盡量細菌避免污染。
6、 應(yīng)注意設(shè)立OD調(diào)零孔和對照。
7、 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
關(guān)鍵字： MTT溶液;
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