尼羅紅熒光染色溶液
簡(jiǎn)介：
尼羅紅（9-diethylamino-5H-benzo[alpha]-phenoxazine-5-one；Nile red）分子式為C20H18N2O2，分子量為318.37，是一種脂溶性的熒光染料，可以準(zhǔn)確地將細(xì)胞內(nèi)脂類(lèi)物質(zhì)與其他貯藏物區(qū)分開(kāi)，因此經(jīng)常被用于檢測(cè)動(dòng)物以及微生物細(xì)胞內(nèi)油脂情況。
尼羅紅熒光染色法具有快速、簡(jiǎn)便、靈敏，樣品需求量少且能連續(xù)活體檢驗(yàn)等優(yōu)點(diǎn)。它與脂類(lèi)物質(zhì)包括臘酯(wax ester)和三酰甘油(triacylglycerol)以及各種脂肪酸結(jié)合后，在激發(fā)波長(zhǎng)543 nm的激發(fā)下，顯示強(qiáng)烈桔紅色熒光（散發(fā)波長(zhǎng)598 nm）。同時(shí)在紫外光的照射下顯示紅色。
BIOISCO 尼羅紅熒光染色溶液是一種旨在通過(guò)與脂類(lèi)物質(zhì)的結(jié)合并發(fā)出熒光檢測(cè)信號(hào)，快速、敏感、可靠地活體定量測(cè)定細(xì)胞內(nèi)脂類(lèi)成分的常用熒光染料。適用于各種細(xì)胞包括細(xì)菌細(xì)胞，也用于蛋白質(zhì)電泳染色。該產(chǎn)品經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的滅菌處理，即拿即用，但不可用作科研實(shí)驗(yàn)外的其余用途。
組成：
產(chǎn)品編號(hào) | SL002-500ml | Storage |
尼羅紅熒光染色溶液 | 500ml | -20℃ 避光 |
說(shuō)明書(shū) | 一份 |
保存條件：
-20oC避光保存，半年有效。
用戶(hù)自備：
HANK平衡鹽緩沖溶液或PBS緩沖溶液：用于清理細(xì)胞。
胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液：用于細(xì)胞脫離。
完全細(xì)胞培養(yǎng)液：用于細(xì)胞處理所需的培養(yǎng)基。
15毫升錐形離心管：用于細(xì)胞收集的存放。微型臺(tái)式離心機(jī)：用于細(xì)胞沉淀收集。
臺(tái)式離心機(jī)：用于細(xì)胞沉淀收集。
1.5毫升離心管：用于細(xì)胞檢測(cè)操作的容器。
2毫升離心管：用于染色工作液配制的容器。
37℃培養(yǎng)箱：用于孵育反應(yīng)物。
比色皿：用于熒光定量分析。
熒光顯微鏡：用于觀察熒光細(xì)胞。
熒光分光光度儀：用于定量檢測(cè)熒光細(xì)胞和脂類(lèi)產(chǎn)量。
操作步驟（僅供參考）：
方法一、間接法
實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，將試劑盒里的染色液(Reagent A)凍融，置入冰槽里。然后進(jìn)行下列操作。
1、 開(kāi)啟熒光顯微鏡或熒光分光光度儀。
2、 小心抽掉25 cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)液。
3、 加入3毫升用戶(hù)自備的HANK平衡鹽緩沖溶液或PBS緩沖溶液到細(xì)胞培養(yǎng)瓶，覆蓋培養(yǎng)瓶表面。
4、 小心抽掉清洗液。
5、 加入1毫升用戶(hù)自備的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，鋪滿整個(gè)培養(yǎng)平面。
6、 置入37℃培養(yǎng)箱1分種。
7、 振動(dòng)培養(yǎng)瓶，使細(xì)胞脫落。
8、 加入5毫升用戶(hù)自備的完全細(xì)胞培養(yǎng)液。
9、 移入15毫升錐形離心管。
10、 放進(jìn)臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為300 g。
11、 小心抽去上清液。
12、 加入1毫升用戶(hù)自備的HANK平衡鹽緩沖溶液或PBS緩沖溶液，充分混勻。
13、 移入到新的1.5毫升離心管。
14、 加入10微升染色液(Reagent A)到離心管。
15、 用手指輕輕彈動(dòng)離心管，使其充分混勻。
16、 在37℃培養(yǎng)箱孵育10分鐘，避免光照。
17、 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心30秒，速度為16000 g。
18、 小心抽去上清液。
19、 加入1毫升用戶(hù)自備的HANK平衡鹽緩沖溶液或PBS緩沖溶液，充分混勻。
20、（選擇步驟）放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心30秒，速度為16000 g。
21、（選擇步驟）小心抽去上清液。
22、（選擇步驟）加入1毫升用戶(hù)自備的HANK平衡鹽緩沖溶液或PBS緩沖溶液，充分混勻
23、 檢測(cè)方法。
A） 熒光顯微鏡定性分析
1） 移出10微升離心管中的混勻物到載玻片上。
2） 放上蓋玻片或封片。
3） 在熒光顯微鏡下觀察熒光細(xì)胞：激發(fā)波長(zhǎng)543 nm，散發(fā)波長(zhǎng)598 nm――顯示強(qiáng)烈桔紅色熒光細(xì)胞的為脂類(lèi)豐富的陽(yáng)性細(xì)胞。
B） 熒光分光光度計(jì)定量分析
1） 移取1毫升細(xì)胞懸液到1毫升比色皿。
2） 放進(jìn)熒光分光光度計(jì)測(cè)讀：激發(fā)波長(zhǎng)543 nm，散發(fā)波長(zhǎng)598 nm――確定活體細(xì)胞脂類(lèi)產(chǎn)量。
方法二：直接法
實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，將試劑盒里的染色液(Reagent A)凍融，然后移出2毫升用戶(hù)自備的HANK平衡鹽緩沖溶液或PBS緩沖溶液到2毫升離心管，加入10微升染色液(Reagent A)，混勻后，置入冰槽里，標(biāo)記為染色工作液。然后進(jìn)行下列操作。
1、 開(kāi)啟熒光顯微鏡。
2、 小心抽掉25 cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)液。
3、 加入3毫升用戶(hù)自備的HANK平衡鹽緩沖溶液或PBS緩沖溶液到細(xì)胞培養(yǎng)瓶，覆蓋培養(yǎng)瓶表面。
4、 小心抽掉清洗液。
5、 加入2毫升染色工作液。
6、 在37℃培養(yǎng)箱孵育10分鐘，避免光照。
7、 在熒光顯微鏡下觀察熒光細(xì)胞：激發(fā)波長(zhǎng)543 nm，散發(fā)波長(zhǎng)598 nm――顯示強(qiáng)烈桔紅色熒光細(xì)胞的為脂類(lèi)豐富的陽(yáng)性細(xì)胞。
注意事項(xiàng)：
1、 本產(chǎn)品為500毫升（0.5毫克/毫升）規(guī)格 。
2、 操作時(shí)須戴手套。
3、 用戶(hù)可以參考本產(chǎn)品的操作步驟用于細(xì)胞分析。
4、 本產(chǎn)品可用于識(shí)別、定量、以及動(dòng)態(tài)觀察細(xì)胞脂類(lèi)物質(zhì)變化。
5、 尼羅紅為通透性的染料，可以自由進(jìn)入細(xì)胞。
6、 根據(jù)細(xì)胞株的差異，可以適當(dāng)調(diào)整染料劑量，以增強(qiáng)或降低熒光強(qiáng)度。
7、 細(xì)胞培養(yǎng)液里避免使用脂類(lèi)物質(zhì)。
8、 孵育時(shí)，必須避免光照。
9、 使用時(shí)，避免污染母液。
10、 建議細(xì)胞染色完成后，即刻進(jìn)行熒光檢測(cè)分析。
11、 熒光波長(zhǎng)可以用激發(fā)波長(zhǎng)475 nm，散發(fā)波長(zhǎng)580 nm 替代。
關(guān)鍵字： 尼羅紅熒光染色溶液;
伊勢(shì)久（江蘇連云港）生物科技有限責(zé)任公司，成立于2019年，坐落于新亞歐大陸橋東方橋頭堡連云港市。公司由資深行業(yè)專(zhuān)家和雙一流高校博士聯(lián)合創(chuàng)辦，主要從事生化檢測(cè)、病理檢測(cè)和原料酶等相關(guān)試劑的研發(fā)和生產(chǎn)。
我司位于聯(lián)東U谷科技創(chuàng)新谷內(nèi)的2000平米的生產(chǎn)、研發(fā)基地已建成投入運(yùn)行，其中包括150平米的超十萬(wàn)級(jí)的潔凈車(chē)間。我司堅(jiān)持以自主研發(fā)為核心，現(xiàn)已生產(chǎn)出的脲酶、tRNA轉(zhuǎn)運(yùn)核糖核酸、刀豆球蛋白、胰蛋白酶抑制劑等產(chǎn)品，熱銷(xiāo)市場(chǎng)以來(lái)收到了客戶(hù)的廣泛好評(píng)。
公司秉承“ 摯誠(chéng)科研、匠心傳承” 的發(fā)展理念，聚焦于前沿生物技術(shù)的應(yīng)用和創(chuàng)新，努力成為生物科技領(lǐng)域的標(biāo)桿企業(yè)。堅(jiān)持以客戶(hù)為中心，致力于為中國(guó)的科研工作者提供高品質(zhì)的產(chǎn)品和專(zhuān)業(yè)服務(wù)，始終是我們努力的目標(biāo)和方向。