乳酸含量（lactic acid，LA）試劑盒說明書

                                                  分光光度法 50管/24樣

正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定                                             

測定意義：

乳酸是生物體代謝過程中重要的中間產(chǎn)物，與糖代謝、脂類代謝、蛋白質(zhì)代謝及細(xì)胞內(nèi)能量代謝密切相關(guān)，乳酸含量是評估糖元代謝的和有氧代謝的重要指標(biāo)。

測定原理：

乳酸在乳酸脫氫酶的作用下生成丙酮酸，同時使NAD+還原生成NADH和H+，H+傳遞給PMS生成的PMSH2還原INT生成紅色物質(zhì)，在530nm處有特征吸收峰。

組成：

試劑三：粉劑×1支，-20℃避光保存。臨用前加入1.5ml蒸餾水充分溶解。

試劑四：粉劑×1瓶，4℃避光保存。臨用前加15ml蒸餾水充分溶解。

顯色液：臨用前根據(jù)用量按照提取液（V）：試劑三（V）：試劑四（V）：試劑五（m）=1（ml)：0.3（ml)：3（ml)：15（mg）的比例充分混勻。（注意：現(xiàn)配現(xiàn)用，用多少配多少，在棕色瓶中配制，試劑盒中帶有5個棕色空瓶）

自備儀器和用品：

天平、研缽、離心機(jī)、可見分光光度計、1 ml玻璃比色皿、恒溫水浴鍋。

樣本處理：

1. 組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1ml提取液）加入提取液，冰浴勻漿后于4℃，12000g離心10min，取上清測定。

2. 細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104個）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1ml提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；于4℃，12000g離心10min，取上清測定。

3. 血清：直接測定。              

測定操作：

注意：標(biāo)準(zhǔn)對照管和標(biāo)準(zhǔn)測定管只需測定一次，每個樣品測定管設(shè)一個樣品對照管

計算公式：

1. 按照蛋白含量計算

LA含量（μmol/mg prot）=△A樣÷△A標(biāo)×C標(biāo)÷ Cpr

                    =2×△A樣÷△A標(biāo)÷ Cpr

2. 按照樣本質(zhì)量計算

LA含量（μmol/g 鮮重）=△A樣÷△A標(biāo)×C標(biāo)÷ W

                    =2×△A樣÷△A標(biāo)÷ W

1. 按照細(xì)胞數(shù)量計算

LA含量（μmol/104 cell）=△A樣÷△A標(biāo)×C標(biāo)÷ 細(xì)胞數(shù)量

                    =2×△A樣÷△A標(biāo)÷ 細(xì)胞數(shù)量

4. 按照液體體積計算

LA含量（μmol/ml）=△A樣÷△A標(biāo)×C標(biāo)

                    =2×△A樣÷△A標(biāo)

C標(biāo)：標(biāo)準(zhǔn)品濃度，2mmol/L ；W：樣本質(zhì)量，g/ml；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml

注意事項(xiàng)：

1. 若吸光值超過2，請進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂尯笤龠M(jìn)行測定，并在計算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

2. 最低檢出限為1.8μmol/L。