"ROS17/2.8|大鼠成骨細(xì)胞

細(xì)胞背景資料：骨肉瘤；ACI 9935

細(xì)胞形態(tài)特性：詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)

傳代的操作步驟注意事項(xiàng)：1)操作前要洗手，進(jìn)入超凈臺(tái)后手要用75%酒精或0.2%新潔爾滅擦試。試劑等瓶口也要擦試。2)點(diǎn)燃酒精燈，操作在火焰附近進(jìn)行，耐熱物品要經(jīng)常在火焰上燒灼，金屬器械燒灼時(shí)間不能太長(zhǎng)，以免退火，并冷卻后才能夾取組織，吸取過(guò)營(yíng)養(yǎng)液的用具不能再燒灼，以免燒焦形成碳膜。3)操作動(dòng)作要準(zhǔn)確敏捷，但又不能太快，以防空氣流動(dòng)，增加污染機(jī)會(huì)。4)不能用手觸已消毒器皿的工作部分，工作臺(tái)面上用品要布局合理。5)瓶子開(kāi)口后要盡量保持45℃斜位。6)吸溶液的吸管等不能混用。貼壁細(xì)胞傳代的操作步驟：1)吸除培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液。2)向瓶?jī)?nèi)加入胰蛋白酶和EDTA混合液少許，以能覆滿(mǎn)瓶底為限。3)置溫箱中2-5分鐘，當(dāng)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞質(zhì)回縮，細(xì)胞間隙增大后，立即終止消化。4)吸除消化液，向瓶?jī)?nèi)注入Hanks液數(shù)毫升，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶，把殘余消化液沖掉。注意加Hanks液沖洗細(xì)胞時(shí)，動(dòng)作要輕，以免把已松動(dòng)的細(xì)胞沖掉流失，如用胰蛋白酶液?jiǎn)为?dú)消化，吸除胰蛋白酶液后，可不用Hanks液沖洗，直接加入培養(yǎng)液。5)用吸管吸取營(yíng)養(yǎng)液輕輕反復(fù)吹打瓶壁細(xì)胞，使之從瓶壁脫離形成細(xì)胞懸液。6)計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)后，把細(xì)胞懸液分成等份分裝入數(shù)個(gè)培養(yǎng)瓶中，置溫箱中培養(yǎng)。懸浮細(xì)胞傳代的操作步驟：1)吸出細(xì)胞培養(yǎng)液，放入離心管中，離心1000rpm5分鐘。2)吸掉上清液，加入適量之新鮮培養(yǎng)基，混和均勻后，依稀釋比例轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)瓶中，以正常培養(yǎng)條件培養(yǎng)。

ROS17/2.8 Cell

98645-43-3

一般使用trypsin-EDTA 濃度為0.25%trypsin-0.53mM EDTA.2Na或0.05%trypsin-0.02mM EDTA.2Na。消化液濃度過(guò)高時(shí)，易造成培養(yǎng)基中細(xì)胞碎片增多，黑渣子增多，常規(guī)細(xì)胞傳代時(shí)建議用0.05%的胰酶進(jìn)行消化，對(duì)于難消化的細(xì)胞可采用0.25%胰酶進(jìn)行消化，細(xì)胞密度過(guò)高超過(guò)80%時(shí)，采用分步消化法。胰酶儲(chǔ)存在-20°C，解凍在4°C進(jìn)行，次開(kāi)瓶后應(yīng)立即少量分裝于無(wú)菌試管中，保存于-20°C，避免反復(fù)冷凍解凍造成trypsin之活性降低，并可減少污染之機(jī)會(huì)。胰酶消化的程度是細(xì)胞培養(yǎng)中的一個(gè)關(guān)鍵步驟：消化過(guò)度細(xì)胞碎片增多，黑渣子增多，細(xì)胞會(huì)成片脫落，嚴(yán)重影響細(xì)胞活性，并有部分細(xì)胞漂浮，隨棄去的胰酶流失；消化不足則細(xì)胞難于從瓶壁上吹下，反復(fù)吹打同樣也會(huì)損傷細(xì)胞活性。不同細(xì)胞對(duì)消化液的敏感性不同，胰酶消化的時(shí)間也會(huì)有差異。胰酶消化時(shí)間與胰酶的濃度，是否含EDTA，胰酶的儲(chǔ)存時(shí)間，胰酶的儲(chǔ)存溫度，是否反復(fù)凍融，消化加入的胰酶體積，消化溫度及細(xì)胞的密度有關(guān)。對(duì)于新購(gòu)買(mǎi)的細(xì)胞，建議客戶(hù)先用低濃度的胰酶仔細(xì)去摸索一下消化時(shí)間，可每隔1分鐘鏡下觀(guān)察細(xì)胞是否變圓，記錄消化時(shí)間，下一次操作參考之前的記錄來(lái)控制時(shí)間即可。

ROS17/2.8|大鼠成骨細(xì)胞

細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞產(chǎn)品包裝：復(fù)蘇形式：T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：1ml凍存管(兩支)

CCRF-CEM [CCRF CEM]細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：懸浮；細(xì)胞背景資料：急性T淋巴細(xì)胞白血?。慌?/div>