"Raji Lymphoblastoid cells人Burkitt’s淋巴瘤細(xì)胞系 細(xì)胞背景資料:Raji細(xì)胞由PulvertaftRJV于1963年從一位11歲黑人男孩的左上頜骨的Burkitt淋巴瘤中分離建立的,是個(gè)人類造血系統(tǒng)的連續(xù)傳代細(xì)胞,為B細(xì)胞起源。該細(xì)胞中含有EBV,需要在二級(jí)生物安全柜中操作;可作轉(zhuǎn)染宿主。 細(xì)胞形態(tài):淋巴母細(xì)胞樣 貼壁細(xì)胞消化傳代時(shí)通常采用兩種方法:一、加入胰酶等細(xì)胞脫落后,再加培養(yǎng)基中止胰酶作用,離心傳代;二、加入胰酶后,鏡下觀察待細(xì)胞始脫落時(shí),棄胰酶,加培養(yǎng)液分瓶。但前者太麻煩,而后者有可能對(duì)細(xì)胞施加胰酶選擇,因?yàn)榭偸琴N壁不牢的細(xì)胞先脫落,對(duì)腫瘤細(xì)胞來說,這部分細(xì)胞有可能是惡性程度較高的細(xì)胞亞群。一種簡(jiǎn)單的消化傳代方法。加入PBS洗去血清或加入胰酶先中和血清的作用(30s),棄之,再加入適量胰酶作用10s-40s(根據(jù)細(xì)胞消化的難易程度),棄之,這樣依賴殘余的胰酶就可將細(xì)胞消化單細(xì)胞。對(duì)于較難消化的細(xì)胞,可以用2%利多卡因消化5-8分鐘,然后再棄去,加培養(yǎng)基吹打也可以,對(duì)細(xì)胞的影響不大。不用PBS也不用Hanks洗,只要把舊培養(yǎng)液吸的干凈一點(diǎn),直接加酶消化應(yīng)該不會(huì)有什么問題。棄培養(yǎng)液后,用0.04%的EDTA沖洗一次,再用1/4v的0.04%的EDTA室溫孵育5min,棄取大部分EDTA,加入與剩余EDTA等量的胰酶(預(yù)熱)總體積1/10v。消化到有細(xì)胞脫落。不過有人說EDTA對(duì)細(xì)胞不好,有證據(jù)嗎?培養(yǎng)的BASMC:倒掉舊培養(yǎng)液加入少量胰酶沖一下,倒掉再加入0.125-0.25%胰酶約6-10滴或1ml(25ml bottle)消化再加入適量新培養(yǎng)基中和,并分瓶這種方法簡(jiǎn)單、省事;效果很好并且不損失細(xì)胞! NUGC2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SuDHL 1細(xì)胞、GM05887A細(xì)胞、P3/X63/Ag8.653細(xì)胞 CaEs17細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:X63Ag8-653細(xì)胞、SU-DHL-4細(xì)胞、B16/BL6細(xì)胞 CTV1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Intestinal Epithelioid Cell line No. 6細(xì)胞、NEC細(xì)胞、PANC.1細(xì)胞 細(xì)胞生長(zhǎng):懸浮 Raji Lymphoblastoid cells人Burkitt’s淋巴瘤細(xì)胞系 細(xì)胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細(xì)胞培養(yǎng)中支原體污染的經(jīng)驗(yàn)分享:支原體是一類缺乏細(xì)胞壁的原核細(xì)胞型微生物,大小一般在0.3-0.5um之間,呈高度多形性,有球形、桿形、絲狀、分枝狀等多種形態(tài)。它不同于細(xì)胞,也不同于病毒。支原體用普通染色法不易著色,用姬姆薩染色很淺,革蘭染色為陰性。支原體可在雞胚絨毛尿囊膜上或細(xì)胞培養(yǎng)中生長(zhǎng),營(yíng)養(yǎng)要求比細(xì)菌高。細(xì)胞培養(yǎng)(特別是傳代細(xì)胞)被支原體污染是個(gè)世界性問題。在細(xì)胞培養(yǎng)中支原體感染發(fā)生率達(dá)到63%,支原體感染發(fā)生后能改變細(xì)胞的DNA,RNA及蛋白表達(dá),又不能通過可視法對(duì)其進(jìn)行檢測(cè),而且它對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)率影響較小,不易引起注意。國內(nèi)外研究表明,95%以上是以下四種支原體:口腔支原體(M.orale)、精酸支原體(M.arginini)、豬鼻支原體(M.hyorhinis)和萊氏無膽甾原體(A.laidlawii),為牛源性。以上是最常見的污染細(xì)胞培養(yǎng)的支原體菌群,但能夠污染細(xì)胞的支原體種類是很多的,國外調(diào)查證明,大約有二十多種支原體能污染細(xì)胞,有的細(xì)胞株可以同時(shí)污染兩種以上的支原體。支原體污染的來源包括工作環(huán)境的污染、操作者本身的污染(一些支原體在人體是正常菌群)、培養(yǎng)基的污染、污染支原體的細(xì)胞造成的交叉污染、實(shí)驗(yàn)器材帶來的污染和用來制備細(xì)胞的原始組織或器官的污染。組織細(xì)胞培養(yǎng)工作中,主要從以下幾個(gè)方面來預(yù)防支原體的污染:控制環(huán)境污染;嚴(yán)格實(shí)驗(yàn)操作;細(xì)胞培養(yǎng)基和器材要保證無菌;在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入適量的抗生素。支原體污染細(xì)胞后,特別是重要的細(xì)胞株,有必要清除支原體,常用方法有抗生素處理、抗血清處理、抗生素加抗血清和補(bǔ)體聯(lián)合處理。支原體最突出的結(jié)構(gòu)特征是沒有細(xì)胞壁,一般來講,對(duì)作用于細(xì)胞壁生物合成的抗生素,如萬古霉素等完全不敏感;對(duì)多粘菌素(polymycin)、利福平、磺胺藥物普遍耐藥。對(duì)支原體最有抑制活性及常用于支原體感染治療的抗生素是四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類及一些喹諾酮;其他類抗生素如基糖苷類、霉素對(duì)支原體有較小抑制作用,所以常不用來作為支原體感染的化學(xué)治療劑。 細(xì)胞傳代方法:維持細(xì)胞濃度在4×105/ml-3×106/ml;根據(jù)細(xì)胞濃度每2-3天補(bǔ)液1次。 LTEPsm細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H596細(xì)胞、ONS76細(xì)胞、LC-1/sq細(xì)胞 BT20細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OV-90細(xì)胞、MDAMB361細(xì)胞、PANC-04-03細(xì)胞 AgC11x3A細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Cloudman M3細(xì)胞、SUM 102細(xì)胞、NTera 2/cl.D1細(xì)胞 D-324 Med細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-SNU-182細(xì)胞、HCT-116細(xì)胞、H2066細(xì)胞 JROECL33細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LS-411N細(xì)胞、HEK AD293細(xì)胞、OCI-AML5細(xì)胞 細(xì)胞來源說明:細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 Raji Lymphoblastoid cells人Burkitt’s淋巴瘤細(xì)胞系 細(xì)胞生長(zhǎng)特性:懸浮生長(zhǎng) 細(xì)胞形態(tài)特性:淋巴母細(xì)胞樣 細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程(請(qǐng)嚴(yán)格遵照無菌操作):1)吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次,加2-3ml 0.25%胰酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時(shí)間,通??刂圃冢?2min);2)鏡下觀察消化情況,在細(xì)胞邊緣縮小,貼壁松動(dòng)時(shí)(不建議消化到細(xì)胞漂浮)去掉胰酶,加6-8ml完全培養(yǎng)基,輕輕吹打細(xì)胞層,盡量把細(xì)胞層吹落,吹散;3)取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,添加適當(dāng)?shù)耐耆囵B(yǎng)基,把細(xì)胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng);4)注意培養(yǎng)基PH值變化情況,定期換液(每周2-3次),待細(xì)胞密度達(dá)到80%以后重復(fù)1項(xiàng)操作或者凍存;特別注意:(如使用公共實(shí)驗(yàn)室或者初次接觸細(xì)胞培養(yǎng),建議添加雙抗培養(yǎng))1)收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快更換為含15%血清的新鮮培養(yǎng)基,如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶,請(qǐng)?jiān)谠颗囵B(yǎng)基中額外添加10%的血清,(原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時(shí)間最長(zhǎng)不宜超過72小時(shí));2)貼壁細(xì)胞收到當(dāng)天切忌立刻消化,請(qǐng)將細(xì)胞換液后放置培養(yǎng)箱孵育到第二天再做消化傳代,請(qǐng)優(yōu)先選擇直徑6cm的培養(yǎng)皿進(jìn)行傳代培養(yǎng);3)如簽收時(shí)出現(xiàn)培養(yǎng)瓶壁破裂,漏液等情況請(qǐng)及時(shí)做好照片記錄并聯(lián)系實(shí)驗(yàn)室。 MDA-MB-231 #4175細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:REC 1細(xì)胞、EBNA293細(xì)胞、ROS17/28細(xì)胞 H1417細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Jiyoye細(xì)胞、GM03671C細(xì)胞、GM2131細(xì)胞 Hs.27細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-526細(xì)胞、Hs 578Bst細(xì)胞、Nb 2細(xì)胞 Z-138細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H838細(xì)胞、LNCaP-FGC細(xì)胞、D283 Med細(xì)胞 LOU-NH91細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CAL-33細(xì)胞、MDA-MB-468細(xì)胞、RINm-5F細(xì)胞 Meat Animal Research Center-145細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hu-P-T3細(xì)胞、CWR22R細(xì)胞、CCD-841-CoN細(xì)胞 C8166-CD4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KRCY細(xì)胞、CAL 27細(xì)胞、SMMC 7721細(xì)胞 NIH-3T3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TM-4細(xì)胞、CAL-85-1細(xì)胞、HA1800細(xì)胞 BA/F3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:DSL-6A-C1細(xì)胞、HEP-3B2細(xì)胞、MDA-MB468細(xì)胞 Panc5.04細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs281T細(xì)胞、H2342細(xì)胞、TOV21細(xì)胞 Raji Lymphoblastoid cells人Burkitt’s淋巴瘤細(xì)胞系 H35 Reuber細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CV-1 in Origin Simian-1細(xì)胞、RN細(xì)胞、MMAc-SF細(xì)胞 GP2d細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CCD19Lu細(xì)胞、GM2131細(xì)胞、GM637細(xì)胞 VMM5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NuTu 19細(xì)胞、HCC9724細(xì)胞、EM3細(xì)胞 OV-1063細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:C127細(xì)胞、SKMES1細(xì)胞、HCT-15細(xì)胞 MCF-7/ADR-RES細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PT67細(xì)胞、B16-F0細(xì)胞、MDAMB-231細(xì)胞 C127細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:M 1細(xì)胞、PTK 1細(xì)胞、TE6細(xì)胞 C127細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:M 1細(xì)胞、PTK 1細(xì)胞、TE6細(xì)胞 COLO320 DM細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RCC 7860細(xì)胞、A431/P細(xì)胞、MDA-1386細(xì)胞 Rh30細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HT 115細(xì)胞、Ramos.G6.C10細(xì)胞、JM-Jurkat細(xì)胞 C3A細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TCC-SUP細(xì)胞、GAK細(xì)胞、CII細(xì)胞 OV-2008細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:IPAM-WT細(xì)胞、MHCCLM3細(xì)胞、R1610細(xì)胞 HEK-EBNA細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK-ES細(xì)胞、Statens Seruminstitut Rabbit Cornea細(xì)胞、MD Anderson-Metastatic Breast-436細(xì)胞 RT-BM-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HUC-1細(xì)胞、HCC1806細(xì)胞、GM 2132細(xì)胞 SK-OV-433細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KYSE-450細(xì)胞、WIL2S細(xì)胞、DMS 273細(xì)胞 IMR 32細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RenCa細(xì)胞、MDA-MB-134 VI細(xì)胞、H1048細(xì)胞 SW 1116細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:WM239A細(xì)胞、PF382細(xì)胞、MCF-12A細(xì)胞 Cloudman S91 melanoma clone M-3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:451Lu細(xì)胞、BNL CL.2細(xì)胞、HBL-1 [Human diffuse large B-cell lymphoma]細(xì)胞 BNL.CL2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TFK-1細(xì)胞、MA-104細(xì)胞、NCIH244細(xì)胞 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