背景[1-3]
人抗IGE受體抗體ELISA KIT用于檢測(cè)包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標(biāo)本中人抗IGE受體抗體的含量。
實(shí)驗(yàn)原理：人抗IGE受體抗體ELISA試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)水平。用純化的待測(cè)物質(zhì)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入待測(cè)物質(zhì)，再與HRP標(biāo)記的待測(cè)物質(zhì)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測(cè)物質(zhì)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物質(zhì)濃度。
人抗IGE受體抗體ELISA KIT
操作流程如下:
(1)待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl,每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔;設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔,每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔,加入純細(xì)胞裂解液100μl。
(2)酶標(biāo)板置4℃,包被過(guò)夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過(guò)洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
(4)陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液100μl。
(8)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
(12) 分別測(cè)450nm吸光值W1和630nm吸光值W2,最終測(cè)得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本(S)和陰性對(duì)照(N)的OD值后,計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)。
應(yīng)用[4][5]
用于慢性特發(fā)性蕁麻疹相關(guān)抗體和B淋巴細(xì)胞刺激因子檢測(cè)及意義研究
探討抗高親和力IgE受體（FcεRI）抗體、抗IgE抗體、抗幽門螺桿菌（Helicobacter pylori,HP）抗體和抗甲狀腺球蛋白抗體（Thyroglobulin antibody,TGAb）與慢性特發(fā)性蕁麻疹（Chronic idiopathic urticaria,CIU）發(fā)病的關(guān)系。探討血清中B淋巴細(xì)胞刺激因子（B lymphocyte stimulator,BlyS）能否刺激慢性特發(fā)性蕁麻疹患者B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗FcεRI抗體或抗IgE抗體,導(dǎo)致CIU發(fā)病。
方法：研究設(shè)CIU患者組、急性蕁麻疹（Acute urticaria,AU）患者組和健康對(duì)照組,每組300例。每位受試者均進(jìn)行自體血清皮膚試驗(yàn)（Autologous serum skin test,ASST）,過(guò)敏原篩查,檢測(cè)血清總IgE、抗FcεRI抗體、抗IgE抗體、抗HP抗體、TGAb水平及陽(yáng)性率,分析以上抗體與CIU發(fā)病的相關(guān)性。CIU組和健康對(duì)照組采用酶聯(lián)免疫吸附法（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA）測(cè)定血清中BlyS水平,分離并培養(yǎng)外周血B淋巴細(xì)胞,在培養(yǎng)液中加入BlyS,ELISA法檢測(cè)培養(yǎng)液中抗FcεRI抗體和抗IgE抗體水平。分析CIU組與健康對(duì)照組血清BlyS水平,抗FcεRI抗體和抗IgE抗體水平的差異,以及CIU患者B淋巴細(xì)胞在體外經(jīng)BlyS刺激后,抗FcεRI抗體和抗IgE抗體與體內(nèi)檢出結(jié)果的符合率。
結(jié)果：1.CIU組ASST陽(yáng)性率為53%,AU組為12%,健康對(duì)照組未發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性者；CIU組和健康對(duì)照組過(guò)敏原檢測(cè)均為陰性,而AU組大部分能檢測(cè)到食物或吸入物過(guò)敏原,陽(yáng)性率為86%；CIU組抗FcεRI抗體和抗IgE抗體水平均高于AU組和健康對(duì)照組（p＜0.05）;CIU患者IgE水平低于健康對(duì)照組（T=190.00,p＜0.05）,而AU組IgE水平高于健康對(duì)照組（T=226.00,p＜0.05）；ASST陽(yáng)性CIU患者抗FcεRI抗體水平較陰性患者高（T=101.73,p＜0.05）,抗IgE抗體在ASST陽(yáng)性和陰性CIU患者間無(wú)差異（T=312.04,p＞0.05）;CIU組、AU組、和健康對(duì)照組抗HP抗體陽(yáng)性率分別為29%、19%和23%,TGAb陽(yáng)性率分別為18%、15%和11%,抗HP抗體和TGAb陽(yáng)性率在三組間比較均無(wú)顯著差異（p＞0.05）；抗HP抗體陽(yáng)性的CIU患者中,抗FcεRI抗體陽(yáng)性率較AU患者和健康人高（p＜0.01）,抗IgE抗體陽(yáng)性率與AU患者和健康人無(wú)差異（p＞0.05）；TGAb陽(yáng)性的CIU患者中,抗FcεRI抗體陽(yáng)性率較AU患者和健康人高（p＜0.01）,抗IgE抗體陽(yáng)性率與AU患者和健康人無(wú)差異（p＞0.05）。
2. CIU患者血清BlyS水平顯著高于健康對(duì)照組（t=3.04,p＜0.01）,抗FcεRI抗體和抗IgE抗體水平也均高于健康對(duì)照組（t=3.51,p＜0.01；t=3.29,p＜0.01）,CIU患者的抗FcεRI抗體陽(yáng)性率顯著高于抗IgE抗體（χ2=142.56,p＜0.05）；CIU患者血清中抗FcεRI抗體和抗IgE抗體水平與BlyS水平呈正相關(guān)（r=0.99,p＜0.01；r=0.91,p＜0.01）；CIU患者外周血B淋巴細(xì)胞培養(yǎng)液中加入有效濃度BlyS后,B淋巴細(xì)胞培養(yǎng)液中抗FcεRI抗體和抗IgE抗體水平均顯著高于不加BlyS的空白對(duì)照（t=3.67,p＜0.01；t=3.56,p＜0.01）,且2種抗體在培養(yǎng)液中的水平也與BlyS濃度呈正相關(guān)（r=0.96,p＜0.01；r=0.91,p＜O.01）；抗FcεRI抗體和抗IgE抗體在CIU患者血清與培養(yǎng)液中的檢出符合率分別為94.76%和87.84%。
結(jié)論：大部分CIU存在抗FcεRI抗體和抗IgE自身抗體,在發(fā)病中起主要作用,可界定為自身免疫性蕁麻疹,抗HP抗體和TGAb與CIU發(fā)病間接相關(guān)。CIU患者血液中BlyS水平增高可刺激B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗FcεRI抗體或抗IgE抗體,可能與CIU發(fā)病有關(guān)。
參考文獻(xiàn)
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