背景及概述^[1][2]

去氫茯苓酸為茯苓的提取物。茯苓的化學(xué)成分較為復(fù)雜，有多糖、三萜、脂肪酸、甾醇及酶等。多糖和三萜為其主要成分。茯苓Poria cocos(Schw.)Wolf，為多孔菌科(Polyporaceae)真菌茯苓的干燥菌核，茯苓是衛(wèi)生部頒布的批，按照傳統(tǒng)既是食品又是藥品的34個品種之一。茯苓為《中華人民共和國藥典》收載品種。其性平，味甘、淡。歸心、肺、脾、腎經(jīng),具有利水滲濕、健脾補中、寧心安神的功效?，F(xiàn)代藥理研究表明，茯苓具有較好的調(diào)節(jié)免疫功能、抗腫瘤、保肝、抗炎和抗衰老等作用。

制備^[1]

步驟1：取茯苓藥材采用60?90％乙醇加熱回流提取2?4次，合并提取液，減壓回收至無醇味，離心；

步驟2：取步驟1離心后的上清液，通過大孔吸附樹脂吸附結(jié)束后，依次用0?50％乙醇洗脫和70?90％乙醇洗脫，乙醇用量按體積比計算為樹脂體積的6?12重量倍，合并70?90％乙醇洗脫液，回收溶劑，減壓干燥，并與離心沉淀合并，得干浸膏I；

步驟3：取浸膏I加甲醇回流提取5?10次，每次提取0.5～2小時，至提取液近無色， 合并提取液，減壓回收溶劑，減壓干燥，得干浸膏II；

步驟4：取浸膏II，加50?200體積份甲醇溶解，拌入20?500重量份硅膠，揮盡溶劑，得到拌樣硅膠；另取空白硅膠500?8000重量份，加石油醚充分溶脹后，濕法裝柱，將拌樣硅膠裝于柱頂，依次采用體積比為100∶1?1∶10的石油醚?丙酮混合溶劑洗脫，洗脫結(jié)束后，依次采用體積比為100∶0?1∶10的氯仿?甲醇混合溶劑梯度洗脫，分份收集；

步驟5：取上述洗脫部分氯仿洗脫流份，減壓回收溶劑，濃縮，拌入空白硅膠，得到拌樣硅膠，采用體積比為50∶1∶0.1?5∶1∶0.1的氯仿?乙酸乙酯?冰醋酸混合溶劑梯度洗脫，分份收集，每50～200ml收集一份，合并流份，減壓回收溶劑，濃縮，拌入空白硅膠，揮盡溶劑，得到拌樣硅膠；

步驟6：按拌樣硅膠質(zhì)量的20?80倍量取空白硅膠，濕法裝柱，將拌樣硅膠加至柱頂，以體積比9∶1∶0.1?10∶1∶0.1的二氯甲烷?乙酸乙酯?冰醋酸混合溶劑進(jìn)行洗脫，分份收集，每50?200ml收集一份，合并流份，減壓回收溶劑，濃縮，拌入空白硅膠，揮盡溶劑，得到拌樣硅膠；

步驟7：按拌樣硅膠質(zhì)量的30?100倍量取空白硅膠，濕法裝柱，將拌樣硅膠加至柱頂，以體積比為18∶1∶0.2?22∶1∶0.2氯仿?乙酸乙酯?冰醋酸混合溶劑進(jìn)行洗脫，分份收集，每30?100ml收集一份，合并流份，回收溶劑，濃縮，靜置析出白色針狀結(jié)晶，用甲醇反復(fù)重結(jié)晶，得單體化合物。

用途 ^[2]

茯苓萃取物及其活性成分可有效提升細(xì)胞內(nèi)膠原蛋白、 細(xì)胞外膠原蛋白及細(xì)胞外透明質(zhì)酸的含量，此即，茯苓萃取物及其活性成分可有效提升內(nèi)源性膠原蛋白及透明質(zhì)酸的含量，故可用于保養(yǎng)肌膚及促進(jìn)傷口愈合。

CN201710789742.0提供一種使用茯苓萃取物于制備一制劑的用途，其中該制劑用于保養(yǎng)肌膚及／或促進(jìn)傷口愈合。較佳地，該茯苓萃取物包含以下的至少一者：去氫茯苓酸（dehydropachymic acid，DPA）、茯苓酸（pachymic acid，PA）、去氫土莫酸（dehydrotumulosic acid，DTA）、土莫酸（tumulosic acid，TA）、豬苓酸C（polyporenic acid C，PAC）、3-表-去氫土莫酸（3-epi-dehydrotumulosic acid，EDTA）、去氫栓菌酸 （dehydrotrametenolic acid，DTTA）、栓菌酸（trametenolic acid，TTA）、去氫層孔菌酸 （dehydroeburicoic acid，DEA）、層孔菌酸（eburicoic acid，EA）、茯苓新酸A（poricoic acid A，PAA）及茯苓新酸B（poricoic acid B，PAB）。更佳地，該茯苓萃取物為茯苓皮部萃取 物，其中以茯苓皮部萃取物的總重量計，茯苓新酸A及茯苓新酸B的總含量不小于40重量%。

A.茯苓萃取物的制備

A-1.取茯苓藥材（來源產(chǎn)地為云南），清洗后剝?nèi)∑渫馄ぃㄏ路Q“茯苓皮部”），其余即為 肉部（下稱“茯苓肉部”）。

取 A-1 所獲得的茯苓皮部，于室溫下，以1：8（茯苓藥材：乙醇水溶液）的體積比浸 泡于75%乙醇水溶液中，歷時12小時，然后煮沸并進(jìn)行萃?。v時3小時）。重復(fù)前述萃取步驟，共三次。合并三次萃取所得的萃取液并過濾以去除不溶物，以獲得一粗萃取物。接著，對前述的粗萃取物進(jìn)行減壓濃縮以去除溶劑，再以噴霧干燥機進(jìn)行干燥，以獲得一粗萃物粉 末。

取 A-2 所獲得的粗萃物粉末，以1：8（粗萃物粉末：乙醇水溶液）的體積比與95%乙 醇混合，并進(jìn)行萃?。v時3小時），接著，再利用以硅膠為固定相的管柱進(jìn)行分離，獲得一茯苓皮部萃取物。

以液相層析／紫外光／質(zhì)譜儀，分別于243納米及210納米波長下檢測 A-3 所獲得 的茯苓皮部萃取物的成分，并以高效液相色譜法定量該萃取物中各成分的含量，分析結(jié)果示于表1。

A-5.合并 A-1 所獲得的茯苓皮部及茯苓肉部，重復(fù)上述 A-2 及 A-3的萃取步驟，以 獲得一茯苓萃取物。接著，以 A-4 的分析方法檢測所獲得的茯苓萃取物的成分。結(jié)果顯示， 該茯苓萃取物含有去氫茯苓酸、茯苓酸、去氫土莫酸、土莫酸、豬苓酸C、3-表-去氫土莫酸、 去氫栓菌酸、栓菌酸、去氫層孔菌酸、層孔菌酸、茯苓新酸A及茯苓新酸B等成分。

茯苓萃取物的活性成分的制備

B-1.以1：500（萃取物：甲醇）的體積比，將 A-5 所獲得的茯苓萃取物均勻溶解于甲醇 中。過濾去除不溶物后，以制備級高效能液相層析儀（以甲醇與水混合作為移動相），分別于 243納米及210納米波長下，針對去氫茯苓酸、茯苓酸、去氫土莫酸、土莫酸、豬苓酸C、3-表- 去氫土莫酸、去氫栓菌酸、栓菌酸、去氫層孔菌酸、層孔菌酸、茯苓新酸A及茯苓新酸B進(jìn)行分 離及收集，收集后再以減壓濃縮機去除甲醇，分別得到去氫茯苓酸、茯苓酸、去氫土莫酸、土 莫酸、豬苓酸C、3-表-去氫土莫酸、去氫栓菌酸、栓菌酸、去氫層孔菌酸、層孔菌酸、茯苓新酸 A及茯苓新酸B。

以液相層析／紫外光／質(zhì)譜儀，分別于243納米及210納米波長下檢測B-1所獲得的 去氫茯苓酸、茯苓酸、去氫土莫酸、土莫酸、豬苓酸C、3-表-去氫土莫酸、去氫栓菌酸、栓菌 酸、去氫層孔菌酸、層孔菌酸、茯苓新酸A及茯苓新酸B，結(jié)果顯示這些成分的純度都大于 98%。

主要參考資料

[1] CN201110057347.6 新去氫茯苓酸【公開】/去氫茯苓酸【授權(quán)】

[2] CN201710789742.0 茯苓萃取物及其活性成分于保養(yǎng)肌膚及／或促進(jìn)傷口愈合的用途